Formation qualifiante : Cytométrie en flux 2 : Maitriser son plateau technique, de l'analyse au tri

Aborder des techniques avancées de cytométrie. Les participants réaliseront des expériences de tri cellulaire sur un trieur FACS ARIAIII, des marquages polychromatiques sur LSRII et apprendront à réaliser et à analyser une expérience à base de billes cytométriques (CBA) analysées sur un Luminex et/ou FACSARRAY.

PARIS

Contenu

artie théorique (10h )
1) Les bases de la cytométrie
• Introduction • Fluidique • Lasers et détecteurs de morphologie cellulaire • Fluorochromes et détecteurs de fluorescence • Compensations •Les contrôles isotypiques • Analyses • Soft • Contrôle qualité
2) Les champs d’application de la cytométrie
• Marquage phénotypique (surface et intracellulaire) • Cycle cellulaire-Apoptose-Anomalies chromosomiques • Réactions d’oxydation-Signal calcique-Marquage d’organelles • Nouvelles applications : analyse de la transduction du signal/Fluorescent Bar Coding/Mesure d’analytes solubles/Imaging des cellules en flux/Cytométrie de masse • Fluorescent Activated Cell Sorting
Partie pratique 25h
Des splénocytes stimulés in vitro seront mis à disposition des participants.
Un marquage CFSE ayant été réalisé avant le début de la stimulation, il sera possible d’étudier le nombre de cycles cellulaires qu’auront effectués ces cellules en fonction de diverses conditions de culture. Les cytokines présentes dans les surnageants de ces cultures seront étudiées par CBA. Des sous-populations spléniques seront triées par cytométrie en flux.
• Marquages polychromatiques ≥ 6 couleurs sur BD LSRII avec traitement des compensations
• Cytometric Bead Arrays et lecture sur Luminex ou FACSARRAY
• Tri cellulaire sur trieur BD ARIA III
• Procédures de maintenance
• Contrôle qualité des cytomètres
• Analyses
• Présentations orales
Table ronde et debriefing

Objectifs

Connaissance des techniques avancées de cytométrie. Savoir réaliser un
tri cellulaire sur un trieur FACS ARIAIII. Savoir analyser des marquages
polychromatiques sur LSRII. Savoir réaliser et analyser une expérience à base de
billes cytométriques (CBA et/ou Luminex). Savoir réaliser le contrôle qualité des
cytomètres BD.
Possibilité de mettre en œuvre des techniques supplémentaires à la demande des
participants (prendre contact avec le responsable au moins 4 semaines avant le
début de la formation)

Prérequis

avoir de solides bases en cytométrie et être en charge de l’animation
d’un plateau technique ou d’une plate-forme de cytométrie.

Diplôme visé

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PARIS 2500 5 jour(s)
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