Formation qualifiante : Electrophorèse SDS-PAGE et Native-PAGE



PARIS

Contenu

PARTIE THÉORIQUE (3 H)
STRUCTURE DES PROTÉINES ET TECHNIQUE D’ÉLECTROPHORÈSE
La partie théorique porte sur la description et la compréhension de la nature et de la structure des gels d’électrophorèse
(conditions natives et dénaturantes). Elle traite également des phénomènes de migration des molécules (des protéines, en
particulier) dans ces différents types de gel. Les différentes informations obtenues par cette technique (masse moléculaire
apparente des protéines, interactions protéine/protéine, informations structurales, etc.) seront également traitées.
PARTIE PRATIQUE (14 H)
MATÉRIEL UTILISÉ/PRÉPARATION DE GELS NATIFS ET GELS DÉNATURANTS ET ÉCHANTILLONS (4H)
MISE EN ŒUVRE DES TECHNIQUES : MIGRATIONS ET DIVERSES COLORATIONS (7H)
ANALYSE DES RÉSULTATS (3H)
La partie pratique permet de réaliser des gels d’électrophorèse en conditions dénaturantes et natives.
- en conditions dénaturantes (SDS-PAGE) : des gels de réticulation variée (8% à 16% d’acrylamide) seront coulés et utilisés pour
faire migrer différents types de protéines.
Plusieurs méthodes de révélation des protéines seront utilisées : bleu de Coomassie, nitrate d’argent et/ou SYPRO-Ruby.
Des essais de renaturation des protéines en gel seront réalisés et la renaturation sera testée par activité enzymatique sur gel.
- en conditions natives (Native-PAGE) : des conditions de pH variables seront testées pour couler les gels et 3 protéines
différentes seront déposées sur les gels.
La révélation se fera par mise en évidence de l’activité enzymatique des protéines sur gel.

Objectifs

Connaissance de la pratique de la séparation des molécules par
électrophorèse.
A l’issue des expérimentations, l’analyse et la discussion des résultats
obtenus dans les différentes conditions expérimentales testées seront faites
afin de permettre aux participants de pouvoir faire le lien entre la partie
théorique et la partie pratique de la formation et ainsi définir les conditions
expérimentales adaptées à l’échantillon à analyser.

Prérequis

N.C

Diplôme visé

Cette formation est pour moi
PARIS 1200 5 jour(s)
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